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3T3-L1細(xì)胞 @慧穎細(xì)胞庫 培養(yǎng)注意事項

發(fā)布時間:2016-02-27瀏覽:3146次

              3T3-L1細(xì)胞 @慧穎細(xì)胞庫 培養(yǎng)注意事項

有的老師在培養(yǎng)3T3-L1細(xì)胞中,發(fā)現(xiàn)都粘附著長在一起,平常狀態(tài)下看起來也會像長滿融合了一樣?;鄯f技術(shù)人員對此總結(jié)了下3T3-L1細(xì)胞傳代步驟以及培養(yǎng)注意事項,僅供各位老師參考:

傳代步驟:

以用10 cm細(xì)胞培養(yǎng)皿培養(yǎng)的3T3-L1細(xì)胞為例:

    1)待培養(yǎng)皿中的細(xì)胞生長至密度為95-100%時,棄細(xì)胞培養(yǎng)基,并加入5ml 1×PBS輕晃洗滌一次;

  2)棄1×PBS,加入1ml胰酶,搖勻使所有的細(xì)胞均被胰酶覆蓋后37℃消化1~2min,顯微鏡下觀察到細(xì)胞變圓并從平皿上脫落下來即為消化*;

  3)加入3ml新鮮的DMEM培養(yǎng)基(含10%FBS,1%雙抗),終止胰酶消化,并將形成的細(xì)胞懸液吹打混勻;

  4)按實驗需要取細(xì)胞懸液接種到新的10 cm細(xì)胞培養(yǎng)皿內(nèi),并用DMEM培養(yǎng)基補足體積至10ml,按十字形的方式搖勻后,置于CO2培養(yǎng)箱37℃條件下繼續(xù)培養(yǎng)。

 

注意事項:

1)不要對細(xì)胞進(jìn)行頻繁的傳代處理,傳代時,細(xì)胞密度已生長至85%以上;

  2)3T3-L1貼壁不是十分牢,禁止培養(yǎng)過程中頻繁地移動;

  3)消化時間不要超過兩分鐘,不要消化過頭,消化過程中,可以在顯微鏡下觀察,細(xì)胞變圓后,輕拍培養(yǎng)皿,如細(xì)胞可以呈流沙狀流動,即可立即終止消化;

  4)終止消化后,細(xì)胞輕輕吹打10~20次即可,不要太用力吹打或者吹打太多次,盡量減少機(jī)械傷害。

5)傳代時接種的細(xì)胞量不要太少,否則容易生長緩慢或者長不動,傳代比例1:3~1:8。

6)如細(xì)胞狀態(tài)還是比較差,可嘗試在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入適量的丙銅酸鈉或谷氨酰胺(如1%)。

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